（一）诊断标准
1.流行病学资料：有到过疫区或与病人接触史；
2.临床表现符合；
3.实验室、胸部X片及其它辅助检查。
（二）检测方法
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所非典型肺炎攻关组已经完成三项对SARS相关冠状病毒进行检测的技术和方法。经对SARS病人尸检标本、血清、细胞培养物等检测证实具有良好的特异性和敏感性。检测方法的进一步质量控制正在进行。
1.非典型肺炎血清安全操作指南
由于非典型肺炎病人血清中存在冠状病毒，在血清样品没有得到妥善处理前，所有操作必须在P3实验室中，按照要求进行！
（1）一般性原则：接触未处理的SARS病人血清时，必须按照规定戴口罩、眼镜，必须戴手套。
（2）PCR：建议使用Trizol试剂或类似试剂从血清中提取RNA，按照说明书要求的量，将血清样品加入Trizol试剂混匀，以后的工作可以在P3实验室外进行。
（3） EIA：所有的操作均应该在P3实验室的生物安全柜中进行，在加入终止液后，可以将酶标板移至P3实验室外进行。需要将洗板机放置在P3实验室的生物安全柜中，使用后的废弃液体必须高压处理。
（4）IFA：所有的操作均应该在P3实验室的生物安全柜中进行，荧光显微镜应置于P3实验室内。需要将洗抗原片装置放置在P3实验室的生物安全柜中，使用后的废弃液体必须高压处理。
2.PCR检测非典型肺炎病原—冠状病毒核酸方法
建立检测SARS相关冠状病毒核酸的PCR方法，可以从SARS患者尸解标本、SARS病毒细胞分离物中检测出冠状病毒核酸，并且能够在患者血清中检测出冠状病毒核酸，确定非典型肺炎的诊断。
（1）方法：
1）标本处理原则：标本处理必须在P3实验室进行，样品中加入Trizol试剂混合完全后，可以移至P3实验室以外操作。
2）RNA提取：病毒RNA提取使用Trizol试剂，取100ml尸解组织悬液、组织培养液或患者血清，按照厂家使用说明书提取病毒RNA。
3）RT-PCR：
①用随机引物在逆转录酶作用下合成第一链cDNA。
②用引物F1和R1进行PCR，循环参数：94°C 30s 50°C 30s 72°C
45s,总共进行35个循环。取第一轮PCR产物1ml，和引物F2和R2进行第二轮PCR，循环参数和第一轮一样。
③引物：
GCTTAGGATAATGGCCTCTC F1
CCACGAATTCATGATCAACATCCC R1
PCR 片段为 341bp
GCTCGCAAACATAACACTTGC F2
GAGACACTCATAGAGCCTGTG R2
PCR 片段为279bp
4）结果判定：PCR用1%琼脂糖凝胶电泳后，在紫外灯下观察PCR产物，出现280左右DNA带为阳性。
5）应用：
①检测组织标本：从3份SARS尸解肺标本和1份脾标本检出冠状病毒RNA聚合酶序列。
②检测细胞培养物：从冠状病毒感染的Vero-E6、RD、HeLa、MDCK、293细胞中检出冠状病毒核酸。
③用PCR检测了20份急性期SARS病人血清，其中4份标本（发病后7-18天）冠状病毒核酸阳性。增加循环至45次数后，有6份标本阳性。
6）下一步工作：正在进行方法的改进，新合成的引物的敏感性明显优于现行的引物，近日将推出用新引物的PCR方法。
3.非典型肺炎血清酶联免疫诊断试剂
建立的SARS病人血清中相关冠状病毒IgM/IgG抗体特异性酶联免疫方法已经试用于SARS病人血清学检测，具有良好的特异性和敏感性。
方法
抗原制备
采用易普及的酶联免疫方法。抗原制备采用Vero E6
分离的非典型肺炎相关冠状病毒，经戊二醛灭活后，超速离心纯化，包被96孔酶联免疫板。
IgM/IgG抗体检测
采用间接法操作流程如下：
【操作步骤】
1）加样品：将标本稀释液100ul（或2滴）加到包被板内（预留阴阳性及空白对照2－5孔），将待检血清用PBS或生理盐水按1：20稀释后取10ul加入反应孔内。
2）加对照：加入阴性对照1－3孔，阳性对照1孔，各100ul对照血清。空白对照1孔空置。
3）温育：将反应板震荡使样品混匀后，置37℃温箱或水浴反应20分钟。
4）洗板：用蒸馏水将浓缩洗涤液15ml稀释至300ml。
①手洗：将反应板孔内容物倾出，将洗涤液注满反应孔，放置30秒钟后用力甩去，如此重复5次后拍干。②机洗：5次，每孔注入洗涤液200ul或注满，停留30秒钟后吸尽拍干。
5）加酶标工作液：每孔加入100ul（或2滴）酶标工作液，置37℃温箱反应20分钟后，洗板5次，洗板操作同步骤4。
6）显色和终止反应：将底物A、B液各50ul（或1滴）加到反应孔内，37℃避光显色10分钟。每孔加入终止液50ul（或1滴）混匀终止反应。
【结果判定】
1.酶标仪设定波长450nm，先用空白调零，然后测定各孔OD值；如果选用双波长测定，不必设置空白对照孔。
2.．当阴性对照平均OD值小于0.08，阳性对照（pc）OD值大于0.30时，说明试剂盒有效且实验操作正确，否则应当重复试验。
3.临界值（CUT—OFF VALUE）＝0.15＋阴性对照平均（NC）OD值（当阴性平均OD值小于0.05时，按0.05计算；当阴性平均OD值大于或等于等于0.05时按实际值计算）。
4.标本OD值≤临界值为阴性，标本OD值>临界值为阳性。
【注意事项】
1.试剂盒置2－8℃保存。
2.严格按说明书操作。反应温度和时间必须严格控制。
总特异性
IgM抗体检测特异性＝36＋27/70＝90％
IgG抗体检测特异性＝34＋24/58＝83％
另外：在北京发烧病人血中检出非典型肺炎感染者。河北省正定县未发现血清学阳性指标。
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